p型链怎么使用方法？
P-type Chain 即阳性链，由5个阳离子连接的含有一个游离磷酸基团的寡聚核苷酸序列。根据靶序列的不同分为基因阳性链(Genomic P-Type Chain) 和引物阳性链（Primer p-Type chain）两种。 Gene P-Type Chain 在构建时，将目的基因片段连接到一段带有一段反向重复序列的载体DNA上，构成含有一个互补夹子的双链分子。通过碱沉淀或凝胶电泳分离这两个相互匹配的序列，就可以得到带有完整基因片段的 Gene p-Type Chain。然后利用链断裂和修复的原理，基因片段与单链寡核苷酸组成合成引物，进行PCR扩增。
以人类甲状腺素酶基因片段为例建立Gene P-Type Chain。以人甲状腺cDNA为模板，在Oligo2.0软件的指导下设计一对引物，利用RT-PCR技术获得包含目标片段的cDNA片段。该片段连接到pGEM-T easy载体的5'端，形成含有目的基因片段的合成引物。最后进行PCR扩增，以获得所需要的蛋白编码基因。 图1. 以甲状腺素酶基因片段为例建立P型链
Primer P-Type Chain 利用合成的引物和dNTPs在DNA聚合酶作用下延伸，即可生成含有互补接头的一串随机核苷酸，再经PCR和纯化，即可获得目的条带。其原理就是利用引物的5'端结合活性，选择性地引导dNTPs加到模板DNA的3'端，进而填充由引物3'端所缺失的核苷酸序列，实现模板的延长。当这段随机核苷酸达到预期的长度后，再通过酶切、连接等步骤，使每条Primer P-Type Chain具有特定的形状。
最后通过筛选，就能够得到所需的特异性片段。
图2. Primer P-Type Chain的合成途径